核酸电泳

没有时间倒入自己的琼脂糖凝胶,制作自己的缓冲液,等待一个多小时才能得到结果?你很幸运,因为核酸电泳每天都变得越来越容易。使用预制凝胶,一体化套件,甚至自动化,您可以完成一项耗时,繁琐的任务,就像微波炉一袋爆米花一样简单 - 并且比祖父在倒回自己的凝胶时更好虽然琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶电泳是可靠的,坚固的技术已经使用了几十年,但仍然有一些令人惊讶的创新,通过在凝胶盒外思考。

Bio-Rad提供最广泛的核酸电泳产品系列之一包括用于水平和垂直凝胶电泳的系统,用于脉冲场电泳的CHEF系统,核酸测序,用于突变分析的DCode,印迹系统以及全部选择的试剂,染色剂和缓冲剂。他们用于常规核酸电泳的所有产品最近都经过升级和优化,以便更快,更方便。“我们尽量让它变得无痛,”基因表达部门产品经理Veronika Kortisova Descamps说道。“研究人员不必花费任何精力思考他们应该将凝胶放入仪器内的方式。即使修理也很容易:如果它们断裂,我们的系统需要大约五秒钟的时间来拆卸和更换电极。“

除了传统的核酸电泳技术,研究人员正在寻找下一波解决方案,这些解决方案不会占用工作日的大部分时间,或者消耗过多的样品。为此,Bio-Rad还提供基于微流体的自动电泳解决方案,用于使用Experion™自动电泳系统进行RNA和DNA分析(以及蛋白质)。根据待分离的生物分子,可提供不同的芯片,并且需要非常少的样品用于分析。例如,RNA芯片可容纳少至5 ng的RNA(Experion RNA StdSens分析试剂盒),为下游应用(如RT-qPCR)保存了珍贵的样品。qPCR的新指南称为MIQE 1强调RNA质量和完整性的重要性,正在通过科学界渗透。Experion系统可帮助研究人员在进行实验时符合MIQE指南。2

“在考虑RNA质量时,许多人只关注纯度。然而,物理完整性 - 无论分子是否降解 - 是后续实验成功的重要因素。Experion的RQI(RNA质量指标)工具提供了一种标准化的RNA质量测量方法,规模为1到10“,Bio-Rad实验室分离部门营销经理Mary Grace Brubacher说。

Lonza提供一整套核酸和蛋白质电泳解决方案,包括琼脂糖粉末,预制琼脂糖凝胶,预制SDS和天然PAGE凝胶,标准品,染色剂和缓冲液。他们的产品专为满足广泛的应用和需求而量身定制,从快速简单的闪光凝胶到支持技术先进应用(如测序和qPCR)的产品。

像Lonza的FlashGel®这样的超快速凝胶系统是业内最热门的趋势之一。其背后的想法是,在您进行下一步之前,一个小的,快速的凝胶分析可以为您提供DNA或RNA的有用快照。FlashGel系统是一个手掌大小的组合电泳盒和transluminator单元。它使用含有预制,预染色凝胶的预制盒式磁带。凝胶以275伏特运行,是标准琼脂糖凝胶推荐的110伏特的两倍多。“它运行得如此之快,”Mary Riley说,“你可以逐字地观察乐队的迁移......对于大多数片段,你会在五分钟或更短的时间内看到乐队的明显分离。对于某些片段,它只需要两分钟。“Flash Gel的一个常用用途是快速分析PCR产物,看看反应是否成功。另一个,

近年来,Lonza跟踪了电泳客户的增加,以支持下一代测序,qPCR和基因分型。琼脂糖凝胶电泳是一种多功能的方法,几乎可以在每个实验室中显示,而SeaKem,NuSieve和Metaphor等Lonza品牌已成为该行业的主要产品。“由于其无与伦比的纯度,我们的琼脂糖还用于一些有趣的非电泳应用,例如制药应用的输送机制,”Riley说。

即使使用像琼脂糖凝胶电泳一样古老而熟悉的技术,仍然可以提出一种完全改变范式的新想法。Faster Better Media(FBM)就是这种情况。该公司围绕一个简单的想法组织 - 一个低导电缓冲液,让您的凝胶在高电压下运行,因此您可以在凝胶上高分辨率分离DNA条带,只需花费一小部分时间来运行常规凝胶凝胶。使用FBM的LB缓冲液,可以提高凝胶盒上的电压,并在十五分钟或更短的时间内完成整个分析。

经过这么多年的保姆凝胶和过热的烦恼,许多科学家很难实现过渡。“我们收到一些有趣的电子邮件,人们说,'当我以250伏的电压运行时,我得到了很好的结果。我们的事情已经达到了300,但我很担心这么高。“ 我回信说,'去吧!' 并且他们很兴奋,他们这样做并且有效!“乔恩布罗迪博士说,他是'1 Faster Better Media的共同拥有者和共同发明者。

传统运行缓冲器中的热量问题源自缓冲器的tris分量。Tris缓冲液具有高电导率,并产生高电流。高电流增加了缓冲器的热量和电导,这进一步增加了电流。来自Faster Better Media的专利发布的基于锂的缓冲液电导率低,不会产生这种反馈回路。使用三硼酸盐EDTA(TBE)或三乙酸乙酯EDTA(TAE)缓冲液进行DNA和RNA电泳是基于传统,而非最佳效用。直到最近,它才受到质疑。

核酸电泳是一种非常着名的常用技术。然而,因为人们正在以新的方式使用核酸,例如在qPCR和下一代测序实验中,所以值得再看一下旧的琼脂糖凝胶,看看你是否仍在充分利用你的设置,你的缓冲液,和你的污渍。

参考文献:

1 Bustin,SA等,“MIQE指南:发布定量实时PCR实验的最小信息”。Clin Chem,55,611-22,2009。

2 Taylor,S,et al。,“RT-qPCR发布符合MIQE指南的数据的实用方法”。Bio-Rad Bulletin#5859,2009。

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